天天做天天爱天天综合网2021,亚洲av日韩综合一区尤物,久热爱精品视频在线,久久国产精品99精品国产

技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁(yè) > 技術(shù)文章 > ELISA試劑盒選購(gòu)四要素
ELISA試劑盒選購(gòu)四要素
更新時(shí)間:2013-10-05   點(diǎn)擊次數(shù):1585次

    ELISA試劑盒有著準(zhǔn)確性高、靈敏度高、特異性強(qiáng)的諸多優(yōu)點(diǎn),在實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用已經(jīng)相當(dāng)普及,絕大多數(shù)是用于檢測(cè)未知樣本中抗原的濃度。現(xiàn)在市面上的ELISA試劑盒既有國(guó)產(chǎn)也有進(jìn)口,數(shù)量繁多令人目不暇接,而且質(zhì)量也是參差不齊,那么我們?cè)鯓硬拍苓x出zui適用的產(chǎn)品呢?首先要根據(jù)我們所要檢測(cè)的分子進(jìn)行檢測(cè),除此以外也還有一些需要加以考量的因素,下面就為大家提供幾點(diǎn)參考。

1. 實(shí)驗(yàn)類型

ELISA試劑盒有多種類型,不過(guò)它們都有一個(gè)共同特點(diǎn),就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cell ELISA和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISPOT是兩種特殊的類型,In-cell ELISA需要將微孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化,然后再用抗體原位檢測(cè)。ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Western blot,先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,然后在膜上檢測(cè)細(xì)胞分泌的抗原形成斑點(diǎn)。此外,我們還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)。

通常人們使用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn),雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測(cè)抗體之間,這種方法既靈敏又有效,受到了許多研究者的青睞。不過(guò)有時(shí)候雙抗夾心法并不是*選擇,例如有時(shí)候抗原特別小讓兩個(gè)大抗體難以附著,又或者抗體只有一個(gè)抗體結(jié)合位點(diǎn)。在上述情況下,競(jìng)爭(zhēng)性ELISA就更為適用,這種方法是采用帶標(biāo)記的純化抗原與樣本中無(wú)標(biāo)記的抗原進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng),以結(jié)合捕獲抗體。


2. 抗體類型

單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA,實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合效果更好。例如,對(duì)于雙抗夾心法而言,用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測(cè)有時(shí)更有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原,隨后單抗再特異性檢測(cè)擁有特定抗原表位的抗原。

雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢測(cè)抗體(不論多抗還是單抗)的配對(duì)很有講究。我們不希望捕獲抗體與檢測(cè)抗體競(jìng)爭(zhēng)抗原上的同一位點(diǎn),為此我們就需要確保捕獲抗體和檢測(cè)抗體所識(shí)別的抗原表位不存在重疊。如果捕獲抗體和檢測(cè)抗體之間發(fā)生了沖突,就會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生較大影響。要避免這一問(wèn)題,我們可以選擇購(gòu)買“matched pair”的捕獲/檢測(cè)抗體對(duì),這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過(guò)驗(yàn)證才推薦的好組合。


3. 交叉反應(yīng)

如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)就會(huì)影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的特異性。其中抗體來(lái)源所帶來(lái)的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個(gè)因素。盡管現(xiàn)在購(gòu)買源自動(dòng)物的抗體越來(lái)越容易,我們?nèi)杂斜匾_認(rèn)一下是否會(huì)產(chǎn)生交叉反應(yīng)的問(wèn)題。在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA檢測(cè)時(shí),檢測(cè)用的二抗必須特異性針對(duì)檢測(cè)一抗,而不能與捕獲抗體起反應(yīng)。如果檢測(cè)用二抗與捕獲抗體結(jié)合,實(shí)驗(yàn)特異性就會(huì)大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測(cè)一抗,來(lái)避免上述問(wèn)題。

與此同時(shí),了解試劑盒中提供的buffer也是有必要的(例如washing buffer和blocking buffer),以免這些buffer含有可能影響抗原抗體相互作用的組分,使檢測(cè)結(jié)果收到影響。


4. 檢測(cè)方式

如今檢測(cè)ELISA有許多途徑,我們可以根據(jù)自己的偏好進(jìn)行選擇。一般ELISA檢測(cè)的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物,抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶(例如通常使用的辣根過(guò)氧化物酶HRP),而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物(如3,3-二氨基聯(lián)苯胺DAB)。這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色,可以通過(guò)分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè),堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結(jié)合在一抗上,也可以結(jié)合在二抗上,還可以使用鏈霉親和素標(biāo)記的酶與親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合。此外ELISA的結(jié)果檢測(cè)還包括放射性檢測(cè)、熒光檢測(cè)、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測(cè)等。

  上述四點(diǎn)涵蓋的問(wèn)題就已經(jīng)很多了,如果您對(duì)考慮購(gòu)買的ELISA試劑盒還有任何疑問(wèn),都可以直接向商家咨詢。各大商家的上也有相應(yīng)的技術(shù)資料提供,可以從中獲取有價(jià)值的產(chǎn)品信息。

上海通蔚生物科技有限公司

上海通蔚生物科技有限公司

地址:上海市金山區(qū)楓涇鎮(zhèn)環(huán)東一路65弄2號(hào)3463室

主營(yíng)產(chǎn)品:ELISA檢測(cè)試劑盒,ELISA試劑盒,酶聯(lián)免疫試劑盒,人ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,豚鼠ELISA試劑盒,兔ELISA試劑盒,羊ELISA試劑盒,牛ELISA試劑盒,雞ELISA試劑盒,鴨ELISA試劑盒

©2019 版權(quán)所有:上海通蔚生物科技有限公司  備案號(hào):滬ICP備14033764號(hào)-3  總訪問(wèn)量:1040004  站點(diǎn)地圖  技術(shù)支持:環(huán)保在線  管理登陸