關于ELISA試劑盒的固相載體原理
更新時間:2014-08-28 點擊次數:2489次
良好的ELISA板應該是吸附機能好,空缺值低。
為比較不同固相在某一ELISA測定中的優劣,可應用如下的試驗:用其他免疫學測定方法選出一個典型的陽性標本和陰性標本,將它們進行一系列稀釋后,在不同的固相載體上按預定的ELISA操縱步驟進行測定,然后比較結果。可作ELISA中載體的材料良多,zui常用的是聚苯乙烯。在ELISA試劑盒中用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠,表面經磨砂處理后吸附面積大大增加。
與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯。人ELISA試劑盒所有單個讀數與全部讀數的均數之差,應小于10%。其長處是表面積極大,反應在懸液中進行,其速率與液相反應近似。
在哪一種載體上陽性結果與陰性結果差別zui大,這種載體就是這一ELISA測定項目的zui合適的固相載體。小珠的另一特點是更易于使洗滌*,使用特殊的洗滌器,使小珠在洗滌過程中動彈淋洗,其洗滌效果遠較板孔的浸泡式為好。ELISA試劑盒常用的檢查方法為:以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔,洗滌后每孔內加入適當稀釋度的酶標抗人IgG抗體,保溫后洗滌,加底物顯色,終止酶反應后,分別測每孔溶液的吸光度。以含鐵的磁性微粒作為ELISA固相載體,反應后用磁鐵的吸引進行分離,洗滌利便,試劑盒一般均配以特殊儀器。
為便于作少量標本的檢測,有制成8聯孔條或12聯孔條的,放入座架后,大小與尺度ELISA板相同。聚苯乙烯經射線照射后,其吸附機能特別是對免疫球蛋白的吸附機能增加,應用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多,但用于間接法測抗體時空缺值較大。也有應用聚苯乙烯膠乳或其他材料制成的微粒作為ELISA試劑盒固相載體的。聚氯乙烯對蛋白質的吸附機能比聚苯乙烯高,但空缺值也略高。聚苯乙烯ELISA板因為原料的不同和制作工藝的差別,各種產品的質量差異很大,因此,每一批號的ELISA板在使用前須事先檢查其機能。
ELISA載體的外形主要有三種:微量滴定板、小珠和小試管。固相載體在ELISA測定過程中作為吸附劑和容器,不介入化學反應。板式及珠式ELISA的標本量一般為100-200ul,而小試管可根據需要加大反應體積,標本反應量的增加有助于試驗敏感性的進步。ELISA試劑盒現在已有多種自動化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測,包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,對操縱的尺度化極為有利。