將它們分別進(jìn)行一系列稀釋后,在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟進(jìn)行測(cè)定,然后比較測(cè)定結(jié)果。在哪一種載體上陽(yáng)性結(jié)果與陰性結(jié)果判別zui大,這種載體就是這一試劑盒測(cè)定的zui合適的固相載體。
ELISA檢測(cè)試劑盒的準(zhǔn)備和保存
A. BDNF 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋和使用:在使用前 2 小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。
試劑盒提供 2 管標(biāo)準(zhǔn)品,每管 10ng,每次使用 1 管。
1. 配制 10,000pg/ml 標(biāo)準(zhǔn)品:取 1ml 樣品稀釋液加入標(biāo)準(zhǔn)品管內(nèi),蓋好后靜置 10 分鐘以上,
然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解。
2. 配制 2000pg/ml 標(biāo)準(zhǔn)品:取 0.2ml 10,000pg/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品加入有 0.8ml 樣品稀釋液的
Eppendorf 管中,混勻,做上標(biāo)記。
3. 配制 1000pg/ml→31.2pg/ml 標(biāo)準(zhǔn)品:準(zhǔn)備 6 只 Eppendorf 管,每管加 0.3ml 樣品稀釋液,
分別標(biāo)記上 1000pg/ml, 500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml,31.2pg/ml。取 0.3ml
2000pg/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)記 1000pg/ml 的管中,混勻后同樣取出 0.3ml , 加入下一只管中。
余同此類(lèi)推,直到zui后一只樣品管。
注意:已經(jīng)稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品(10,000pg/ml),應(yīng)在 12 小時(shí)內(nèi)使用。-20℃冷凍保存條件下,2 天
內(nèi)可以使用,ELISA檢測(cè)試劑盒但不得反復(fù)凍融。
B.生物素標(biāo)記抗人 BDNF 抗體工作液的準(zhǔn)備:在使用前 2 小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。
1. 根據(jù)每孔需要 0.1ml 計(jì)算總的用量(實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制 0.1-0.2ml)。
2. 按 1μ ι 生物素標(biāo)記抗人 BDNF 加抗體稀釋液 99μ ι 的比例配制工作液。輕輕混勻。
C.親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物(ABC)工作液的準(zhǔn)備:在使用前 1 小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。
1. 根據(jù)每孔需要 0.1ml 計(jì)算總的用量(實(shí)配時(shí)應(yīng)多配制 0.1-0.2ml)。
2. 按 1μ ι 親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物(ABC)加 ABC 稀釋液 99μ ι 的比例配制工作液。
輕輕混勻。
ELISA檢測(cè)試劑盒操作程序
已稀釋好的 ABC 和 TMB 顯色液在加入酶標(biāo)板孔前都應(yīng)預(yù)先在 37℃中平衡至少 30 分鐘。試
劑或樣品稀釋時(shí),切不可忘記混勻。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。用戶須估計(jì)樣品待測(cè)因子
的含量,決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。
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