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淺談實驗室細菌菌種的保存
更新時間:2010-12-16   點擊次數(shù):3142次

在微生物學、環(huán)境科學、分子生物學、毒理學、酶學、疫苗制備、藥品生產等等領域的實驗過程中,都需要應用各種細菌,儲備標準菌種、參考菌種、特殊菌種是*的,下面就幾種實驗室菌株的保存方法簡述如下。
    1  斜面低溫保存法

    將分純的待存菌接種于適宜的固體斜面培養(yǎng)基上,得到充分生長后,用封口膜封口,貼上標簽,保存于4℃的冰箱中。此法操作簡單、使用方便、不需要特殊設備,是實驗室菌種保存zui常用的方法。但保存時間短,一般每個月都要移種1次,而且菌種容易變異,所以此方法只適合實驗室短期實驗菌株的保存。

    2  半固體瓊脂法

    用接種針將以分純的待存菌,穿刺接種于半固體中,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)后取出,封上無菌的液體石蠟,貼上標簽,放4℃冰箱保存。此方法簡便易操作,不需特殊設備、技術難度不大,但保存的時間不長,一般只能保存1年以內,而且對抵抗力弱以及一些特殊菌種大概只能存活3~6個月,需要頻繁的傳代,這樣很容易使菌株受到污染、變異。所以此方法不適用菌種的長期保存,只適合實驗室一些要求不高的菌種的短期保存。

    3  液體石蠟保存法

    將液體石蠟滅菌,放于37℃恒溫箱中,使水汽蒸發(fā)掉備用。再將已分純的待存菌在zui適宜的斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng),使得到健壯的菌體,用無菌吸管吸取已滅菌的液體石蠟,注入已長好的斜面培養(yǎng)基上,用量以高出斜面1cm為準,將試管直立,貼上標簽,置4℃下保存。此法制作簡單,不需要特殊設備,菌種可以保存1年左右不需要經常移種,缺點是保存的時候需要直立放置。此方法適合實驗室短期菌株的保存,而且保存時需要一定的空間[1]。

    4  高層半固體瓊脂石蠟保存法

    將待存菌經平板劃線分離后,挑單個菌落用接種針反復穿刺接種到高層半固體瓊脂培養(yǎng)基中,經培養(yǎng)箱培養(yǎng)后取出,用滅菌過的液體石蠟滴加到半固體瓊脂菌種管表層約0.5cm高度,貼上標簽,存放4℃冰箱。此法操作簡便,不需要特殊設備,效果好,可以保存菌株1~2年。所以適合實驗室菌株的較長期的保存[2]。

    5  紙片法

    將已分純的待存菌用無菌鑷子鑷取紙片,在紙片上刮取4~5個菌落,放入凍存管內,蓋上蓋子后用封口膠布封住邊緣,貼上標簽,放入冰箱冷凍保存(-20℃左右)。此方法具有操作簡單、不需特殊設備、經濟實用、保存空間小等,而且保存時間至少2年,但對一些營養(yǎng)要求比較高的菌種,存活率不理想。所以此方法適合實驗室一些營養(yǎng)要求不高的菌種較長時間的保存[3]。

    6  甘油液保存法

    將已分純的待存菌接種于肉湯中,37℃培養(yǎng)18~24h,然后按5份肉湯溶液、2份甘油-生理鹽水保存液的比例分裝于滅菌的微量離心管或細胞凍存管中,貼上標簽,置-80℃~-20℃冰箱保存。此法操作簡便,不需要特殊設備,效果好,可以保存菌種3年左右,無變異現(xiàn)象,而且此方法還可以保存一些要求較高的特殊菌種,適用范圍廣。所以此方法適合實驗室普通菌種或特殊菌種的較長期的保存[4]。

    7  濕牛奶凍存法

    將待存菌種于各自生長良好的平板培養(yǎng)基上,經分純后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。用準備好的保護劑牛奶洗下菌苔,再用無菌毛細滴管吸取菌懸液滴入菌種管球部,每管球部約有一半的菌液,之后火焰封口,貼上標簽,保存于-20℃冰箱。此方法操作比較簡便,不需特殊設備、不需要花費很多時間,而且保存時間大約3年,時間較長,不易變性,也不容易污染。所以此方法適合實驗室菌種較長時間的保存[3]。

    8  蒸餾水保存法

    取滅菌蒸餾水6~7ml加于已接待存菌斜面培養(yǎng)基的試管內,用吸管研磨,洗下斜面上的菌苔,充分混勻,將此菌液分裝于滅菌的螺旋小瓶中,或用膠塞密封,貼上標簽,置于4℃保存。此法制作簡單,不需要特殊設備,且不需要經常移種,而且可以保存數(shù)年,但要注意保存的時候需要直立放置。所以此方法適合實驗室菌種的長期保存[4]。

    9  冷凍真空干燥法

    將待存菌分純后,用準備好的保護劑牛奶洗下菌苔,把菌懸液滴入菌種管后,在管口抽取少許棉花塞入管內*處,放入冰箱-40℃速凍40min,放入準備好的混有鹽的冰中,接上真空泵,真空抽干呈粉末狀,火焰封口,貼上標簽,保存于-40℃冰箱。此法保存時間長,可達15年,不易變性,但需要儀器,一般實驗室難以配備,而且過程復雜,操作難度大,需要較長時間才能完成。所以此方法適合具有條件的實驗室菌種的長期保存[3]。

    10  小結

    綜上所述,我們在做實驗過程中或者短期保存菌種時,可以選擇斜面低溫保存法、半固體瓊脂法、液體石蠟保存法、高層半固體瓊脂石蠟保存法、紙片法,進行保存;如果需要較長時間的保存菌株,可以選擇甘油液保存法、濕牛奶凍存法、蒸餾水保存法、冷凍真空干燥法保存菌株,其中冷凍真空干燥法需要實驗室配備好相應的儀器設備。如果一些菌株營養(yǎng)要求比較高的話,可以選擇甘油液保存法、冷凍真空干燥法保存。當然上述菌株保存的方法不是、zui方便的保存法,還需要我們不斷的探索,不斷的研究,找到一種或幾種簡單、方便、時間長的保存方法。

【參考文獻】
  1 胡海林,郭維植.細菌實驗菌種的保存及管理.福建醫(yī)藥雜志,2000,22(1):113.

2 陳秀英.菌種保存方法的比較.中國衛(wèi)生檢驗雜志,2002,12(2):231.

3 葉迎春,趙世鴻,凌體淑. 3種菌種保存法比較. 中國誤診學雜志, 2004,4(3):386.

4 黃霞云.菌種保存方法的改進.廣東醫(yī)學院學報,1999,17(1):7.


 

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