細(xì)胞培育基受各種霉菌、細(xì)菌和支原體污染后,一般都較難掃除或殺滅,其間以支原體更難掃除,因此從防備著眼為上。
一、抗生素除菌法:用BM-1(截耳素衍生物)和BM-2(四環(huán)素衍生物)抑制支原體。
1.抗生素制備:均可用PBS配成250×濃縮液-20℃?zhèn)溆谩?/p>
2.處理:取受支原體污染的細(xì)胞,吸除培育液,參加含BM-1的1640培育液培育3天后,吸除培育液,再參加含BM-2的1640培育液培育4天,如此連續(xù)三個(gè)輪回。
3.檢測:用33258熒光染色鏡檢(每個(gè)輪回末應(yīng)檢測一次)。
4.培育:鏟除支原體后的細(xì)胞,在不加上述抗生素的培育基液中,再傳代培育3~4次。
5.鏡檢:如鏟除不*可再進(jìn)行處理至純潔停止(一般3個(gè)輪回即能被*消除),即先用含BIP培育液培育12天后,再按上述方法處理。
二、加溫除菌法
把受污染的細(xì)胞置41℃中作用5~10小時(shí)。
三、動(dòng)物體內(nèi)接種除菌法
把受支原體污染的腫瘤細(xì)胞接種在同種動(dòng)物皮下或腹腔中,借動(dòng)物免疫系統(tǒng)消除支原體,而腫瘤細(xì)胞卻能在體內(nèi)持續(xù)成長,待一定時(shí)間后,從體內(nèi)取出細(xì)胞培育基再進(jìn)行培育繁衍。
四、巨噬細(xì)胞吞噬法
從動(dòng)物腹腔采取巨噬細(xì)胞,為掃除其它細(xì)胞成分,可先進(jìn)行純化,然后再參加被支原體污染的細(xì)胞培育液中混合培育。在培育過程中,為查看支原體是否已被消除潔凈,可利用支持物培育法驗(yàn)證,取出支持物逐日染色、鏡檢調(diào)查,至支原體已被消除潔凈停止。
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